細(xì)胞復(fù)蘇

將細(xì)胞從液氮中取出后，放到37℃水浴鍋中進(jìn)行快速解凍，邊解凍邊輕微搖晃。

確定凍存管中的細(xì)胞解凍完全后，放到水平離心機(jī)中離心，1000rpm離心2min。

小心吸掉上清，加入500μL培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

一般情況下，T75培養(yǎng)瓶中加10mL的培養(yǎng)基，將細(xì)胞加入到已加培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。輕輕搖晃培養(yǎng)瓶使細(xì)胞均勻分布，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞，觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)是否良好，并觀察細(xì)胞的增殖數(shù)量。細(xì)胞要生長到一定密度再進(jìn)行凍存。

懸浮細(xì)胞不用消化，將細(xì)胞輕輕吹散，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。不同的細(xì)胞要用不同的力度，不然會損傷細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞要進(jìn)行消化，消化完成后，吸到離心管中離心，1000rpm離心3-5min。

培養(yǎng)基重懸細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，凍存密度在5×10⁶-1×10⁷/mL之間。

按照比例加入10%的DMSO，小心重懸細(xì)胞，細(xì)胞和DMSO充分混勻?；蛑苯佑眉?xì)胞凍存液進(jìn)行凍存。將細(xì)胞加入到凍存管中，每管1mL。

將凍存管放到凍存盒中進(jìn)行梯度降溫，最后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。