|
| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | solarbio |
| 貨號 | G3680 |
| 保存條件 | ―20℃,避光, |
| 英文名稱 | Apoptosis |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 1年個(gè)月 |
產(chǎn)品說明：
細(xì)胞凋亡-Hoechst染色試劑盒(Hoechst Staining Kit)是一種采用經(jīng)典的Hoechst33258進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測的快速簡便的試劑盒。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，染色質(zhì)會(huì)固縮，Hoechst33258染色后在熒光顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核會(huì)呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白。Hoechst Staining Kit經(jīng)常用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞以及組織切片的細(xì)胞凋亡檢測。該試劑盒檢測細(xì)胞含量范圍一般為0.1～1×106之間。
自備材料：
1、 可觀察藍(lán)光的熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡
2、 PBS或生理鹽水
3、 載玻片、蓋玻片
4、 預(yù)冷固定液：預(yù)冷的70%乙醇或4%多聚甲醛
操作步驟(僅供參考)：
(一) 貼壁細(xì)胞
1、取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5min或更長時(shí)間，無菌超凈臺內(nèi)吹干或用無菌的PBS或生理鹽水洗滌3次，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌1次。將蓋玻片置于6孔板或其他培養(yǎng)皿內(nèi)，接種細(xì)胞培養(yǎng)過夜，使融合率約為50%～80%。
2、加入干預(yù)條件使細(xì)胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入Hoechst固定液0.5ml，固定10min或更長時(shí)間(可4℃過夜)。
3、去除固定液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。
4、加入Hoechst 33258染色液0.5ml，孵育5min。也宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
5、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。
6、滴一滴抗熒封片劑于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，讓細(xì)胞接觸封片劑，盡量避免氣泡。
7、熒光顯微鏡可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右。
(二)懸浮細(xì)胞
1、離心收集細(xì)胞樣品于1.5ml離心管內(nèi)并棄液，加入Hoechst固定液0.5ml，緩緩懸起細(xì)胞，固定10min或更長時(shí)間(亦可4℃過夜)。
2、低速離心去除固定液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min。洗滌時(shí)手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
3、低速離心離心后吸去大部分液體保留約50μl液體，再緩緩懸起細(xì)胞，滴加至載玻片上，盡量使細(xì)胞分布均勻。
4、稍晾干，使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。
5、滴加Hoechst 33258染色液0.5ml，孵育5min。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。
6、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。
7、滴一滴抗熒光封片劑于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
8、熒光顯微鏡可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右。
(三)組織切片
1、常規(guī)包埋切片。
2、用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min。洗滌時(shí)手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
3、均勻滴上Hoechst 33258染色液0.5ml，孵育5分鐘。
4、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。
5、 將切片置于載玻片上，滴一滴抗熒光封片劑，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
6、熒光顯微鏡可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右。
注意事項(xiàng)：
1、 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。使用抗熒封片劑時(shí)也應(yīng)避光操作。
2、 在為了獲得細(xì)胞沉淀的離心的過程中，對于特殊細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)提高離心力或延長離心時(shí)間。
3、 Hoechst 33258染色液對人體有一定刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。
4、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
