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| 產地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號 | BC1135 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱 | NAD-malic enzyme (NAD-ME) activity detection kit |
| CAS編號 | |
| 保質期 | 1年 |
產品規(guī)格：100管/96樣 產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：840
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關鍵字：NAD-蘋果酸酶試劑盒|活性檢測試劑盒|NAD-ME活性檢測|試劑盒
簡要介紹：
ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產生丙tong酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應，是蘋果酸代謝的關鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物ME活性測定較多，已經成為抗氧化研究的熱點。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
產品詳細描述
產品內容：
提取液：液體 110mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前吸取 10mL 提取液加入充分溶解備用； 試劑三：粉劑×1 支，4℃保存；用時每支加 1mL 雙蒸水充分溶解備用；
試劑四：粉劑×1 支，-20℃保存；用時每支加 500μL 雙蒸水充分溶解備用。
工作液：在 7.5mL 試劑二中加入 1mL 試劑三和 0.5mL 試劑四，可以根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配。
產品說明：
ME 廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產生丙tong酸和 CO2，以及伴隨 NAD(P)+的還原反應，是蘋果酸代謝 的關鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物 ME 活性測定較多，已經成為抗氧 化研究的熱點。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NAD-ME 催化 NAD+還原成 NADH，在 340nm 下測定 NADH 增加速率。
試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、可調節(jié)移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板 和蒸餾水
操作步驟：
粗酶液提取：
細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，棄上清，按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）。8000g 4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測。
組織：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置 冰上待測。
血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟
紫外分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調零。
將試劑一在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）中保溫 15min 左右。 3、操作表：
| 試劑名稱（μL） | 測定管 |
| 試劑一 | 200 |
| 工作液 | 90 |
| 樣本 | 10 |
將上述試劑按順序加入微量石英比色皿/96 孔 UV 板中混勻，在 37℃（哺乳動物）或 25℃ （其它物種），340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和反應 5min 后的吸光度 A2，計算ΔA=A2-A1。
注意事項：
若 A2-A1 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，使 A2-A1 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。
實驗時，樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一 37℃或 25℃水浴放置。 3、比色皿中反應液的溫度必須保持 37℃或 25℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃或 25℃蒸餾水， 將此燒杯放入 37℃或 25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。用 96 孔板做時盡量保持反應溫度在 37℃或 25℃。
4、*兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。用96 孔板做 時盡量做到樣本反應時間一致。
5、如果ΔA＜0.01，可將反應時間延長到 10 分鐘。
NAD-ME 活性計算：
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
組織中 NAD-ME 活力的計算:
按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=965×ΔA÷Cpr
按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T =965×ΔA÷W
細菌或細胞中 NAD-ME 活力的計算:
按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=965×ΔA÷Cpr
按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單 位。
NAD-ME（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=1.93×ΔA
血清中 NAD-ME 活力的計算:
單位的定義：每 mL 血清在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-ME（U/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷V 樣÷T =965×ΔA V 反總：反應體系總體積，3×10 -4 L；
ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3 L/mol/cm；d：比色皿 光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。
用 96 孔板測定的計算公式：
將上述公式中的 d-96 孔板光徑改為 0.9cm 進行計算。
