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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | BC0445 |
| 保存條件 | 2-8℃保存 |
| 英文名稱 | Ribulose bisphosphate carboxylase/oxygenase (Rubisco) activity assay kit |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣 產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價(jià)格：6000
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵字: 二磷酸核酮糖羧化酶檢測(cè)試劑盒|加氧酶檢測(cè)試劑盒|Rubisco檢測(cè)試劑盒|二磷酸核酮糖羧化酶|加氧酶|試劑盒
簡(jiǎn)要介紹：
核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（Rubisco, EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一個(gè)關(guān)鍵酶，既控制著CO2的固定，同時(shí)又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流，其活性的大小直接影響著光合速率。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入1mL雙蒸水充分溶解待用；
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入1mL雙蒸水充分溶解待用；
產(chǎn)品說(shuō)明：
1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（Rubisco, EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一個(gè)關(guān)鍵酶，既控制著CO2的固定，同時(shí)又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流，其活性的大小直接影響著光合速率。
在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）與1分子的CO2結(jié)合，產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA）；（2）PGA可通過(guò)外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用，產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸，伴隨著NADH氧化生成NAD+；（3）在340 nm NADH有特征吸收峰，而NAD+沒(méi)有此吸收峰，因此測(cè)定340nm吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/ 96孔UV板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液制備：
1、細(xì)菌或細(xì)胞樣品的制備：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。建議選取新鮮的植物樣本。
二、測(cè)定步驟：
紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
工作液的配制：臨用前在試劑二中加入全部試劑一，充分混勻，在 25℃孵育5min。
按下表步驟加樣：
| 試劑名稱 | 測(cè)定管 | 空白管 |
| 樣本（μL） | 20 | - |
| 蒸餾水（μL） | - | 20 |
| 試劑三（μL） | 7 | 7 |
| 試劑四（μL） | 7 | 7 |
| 工作液（μL） | 180 | 180 |
記錄340nm處20s時(shí)吸光值A1和5min20s時(shí)的吸光值A2，計(jì)算ΔA測(cè)定=A1測(cè)定-A2測(cè)定，ΔA空白=A1空白-A2空白，ΔA =ΔA測(cè)定-ΔA空白。反應(yīng)溫度保持在25℃?？瞻坠苤蛔?/span>1-2管。
三、Rubisco活性計(jì)算：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1 nmolNADH為一個(gè)酶活力單位。
Rubisco活力（U/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T =344×ΔA÷Cpr
此法需要測(cè)定粗酶液中蛋白質(zhì)濃度，建議選購(gòu)本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)濃度測(cè)定試劑盒。
2、按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：25℃中每g組織1 min氧化1 nmolNADH為一個(gè)酶活力單位。
Rubisco活力（U/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T=344×ΔA÷W
3、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
單位的定義：25℃中每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞1 min氧化1 nmolNADH為一個(gè)酶活力單位。
Rubisco活力（U/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T=0.69×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.14×10-4L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/ mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
將上述公式中光徑d-96孔板光徑改為0.6cm進(jìn)行計(jì)算。
