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堿性木聚糖酶（BAX）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào)：BC3610
規(guī)格：50T/24S
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價(jià)格：460.00
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞：堿性木聚糖酶|堿性木聚糖酶活性檢測(cè)|BAX|BAX活性檢測(cè)
產(chǎn)品內(nèi)容：
緩沖液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，4℃保存。10mg 木糖。臨用前加入 667μL 蒸餾水配制成 100μmol/mL 的木糖標(biāo)
準(zhǔn)溶液。再稀釋 50 倍即 2μmol/mL 的木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
產(chǎn)品說(shuō)明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱(chēng)為戊聚糖酶或半纖維素酶，
可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋
放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)
中，堿性木聚糖酶（BAX）一般分離自最適生長(zhǎng) pH 為 9-11 的微生物。
BAX 在堿性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與 3,5-二硝基
水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在 540nm 處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，
通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液在 540nm 吸光值增加速率，可計(jì)算 BAX 活力。
需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋，可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取
1. 發(fā)酵液：發(fā)酵液于 8000rpm，4℃，離心 15min，取上清，作為待測(cè)樣品。
2. 酶干粉：稱(chēng)約 1mg，加 1mL 緩沖液溶解，蒸餾水稀釋 10 倍待測(cè)。
3. 組織樣品：稱(chēng)約 0.1g 組織，加入 1mL 緩沖液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，離心 15min，取
上清蒸餾水稀釋 10 倍待測(cè)。
二、測(cè)定步驟
1、可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定（在 EP 管中加入下列試劑）
試劑名稱(chēng)（μL） 對(duì)照管 測(cè)定管 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管
樣品 200 200 - -
2μmoL/mL 木糖標(biāo)準(zhǔn)品 - - - 200
蒸餾水 - - 200 -
緩沖液 300 300 300 300
試劑一 - 200 200 200
混勻，50℃水浴中反應(yīng) 30min，立即沸水浴中 10min 滅活。(注意不要讓蓋子爆開(kāi)，以免進(jìn)
水，改變了反應(yīng)體系)
試劑一 200 - - -
試劑二 300 300 300 300
混勻，沸水浴中顯色 5min(注意不要讓蓋子爆開(kāi)，以免進(jìn)水改變了反應(yīng)體系)，冷卻后盡快
測(cè)定各管 540nm 下的吸光度，分別記為 A 測(cè)定、A 對(duì)照、A 標(biāo)準(zhǔn)、A 空白。
三、BAX 活性計(jì)算：
1. 發(fā)酵液 BAX 活力計(jì)算：
酶活定義：50℃，pH 9.0 條件下，每毫升發(fā)酵液每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1μmol 還原糖所需的酶
量為一個(gè)堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX 活力（U/mL）=C 標(biāo)準(zhǔn)×（A 測(cè)定-A 對(duì)照）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）÷T
=0.067×（A 測(cè)定-A 對(duì)照）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）
C 標(biāo)準(zhǔn)：木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，2μmoL/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。

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