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土壤FDA 水解酶活性檢測(cè)試劑盒說明書
微量法

產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
英文名稱：Soil FDA hydrolase activity test kit
注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
貨號(hào)：BC0485
規(guī)格：100T/48S
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價(jià)格：1200
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞：土壤FDA水解酶|土壤FDA水解酶活性檢測(cè)|土壤FDA水解酶檢測(cè)|FDA|FDA水解酶
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加2mL 丙tong溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 瓶，10mg 熒光素，-20℃避光保存。臨用前加入3.03mL 50%丙tong（丙tong（V）：
蒸餾水（V）=1:1）配成10μmol/mL 的熒光素標(biāo)準(zhǔn)溶液，可45℃水浴促進(jìn)溶解。

產(chǎn)品說明：
FDA 水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。
FDA 是一種無色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在490nm 處有強(qiáng)吸收峰，通過檢測(cè)490nm 處的吸光值變化可計(jì)算得FDA 水解酶活性。

需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋、丙tong、30 目篩或更小。

操作步驟：
一、樣本處理
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30 目篩。
二、測(cè)定操作表
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至490nm，50%丙tong調(diào)零。
2. 將10μmol/mL 的熒光素標(biāo)準(zhǔn)溶液用50%丙tong稀釋為2、0μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液（0 為空白管）。分別吸取200μL 于比色皿/96 孔板中測(cè)定490nm 下的吸光度A 標(biāo)準(zhǔn)，A 空白，計(jì)算ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。
對(duì)照管         測(cè)定管
樣本（g）                0.03            0.03
試劑一（μL）             150             150
丙tong（μL）               135              -
試劑二                    15              15
充分混勻，37℃，震蕩1h
丙tong（μL）                 -               135
10000g，25℃，離心5min，取200μL 上清測(cè)定490nm 處吸光值A(chǔ)，分別記為A 測(cè)定管、A 對(duì)照管。計(jì)算△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一到兩次。

三、FDA 水解酶活性計(jì)算公式
酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。
FDA 活性（U/g 土樣）=（△A÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)×C 標(biāo)準(zhǔn)品）×V 反總÷W ÷T=14.4×（△A÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)）÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度2μmol/mL；
V 反總：反應(yīng)總體積，0.3 mL；
W：樣本質(zhì)量，g ；
T：反應(yīng)時(shí)間，1h =1/24d。

注意事項(xiàng)：
1. 盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性。
2. 測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值大于1.2，請(qǐng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。 若吸光值過小，可增加土樣質(zhì)量或增加反應(yīng)時(shí)間來進(jìn)行測(cè)定。