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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）活性檢測(cè)試劑盒說明書
可見分光光度法

產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷85A三樓
英文名稱：Soil N-acetyl-β-D-glucosidase (S-NAG) activity assay kit
產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào)：BC4000
規(guī)格：50T/24S
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            
參考價(jià)格：840
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨
關(guān)鍵詞：土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶|S-NAG|S-NAG活性檢測(cè)
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體30mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入3mL 丙同溶解，用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑三：液體60mL×1瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，5 mmol/L的對(duì)硝基ben酚溶液，4℃保存。臨用前用試劑一將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋50倍得100μmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

產(chǎn)品說明：
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）是土壤微生物分泌的溶酶體中的一種酸性水解酶。其活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
S-NAG分解對(duì)硝基benβ-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對(duì)-硝基ben酚，后者在400nm有*吸收峰，通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算NAG活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、30-50目篩（或更?。┖驼麴s水。

操作步驟：
一、樣本處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30-50目篩。

二、測(cè)定步驟：
（1）分光光度計(jì)預(yù)熱30min，波長(zhǎng)調(diào)至400nm，蒸餾水調(diào)零。
（2）加樣表：
試劑名稱      測(cè)定管      對(duì)照管      標(biāo)準(zhǔn)管      空白管
風(fēng)干土樣（g）  0.1          0.1          -           -
試劑一（μL）   550         550          -           -
試劑二（μL）   50           -           -           -
混勻， 37℃水浴1h 后，立即沸水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水/冰浴冷卻。
試劑二（μL）    -           50          -           -
12000g 25℃離心10min，取上清液
上清液（μL）   500          500         -           -
標(biāo)準(zhǔn)品（μL）   -           -          500             -
蒸餾水（μL）   -           -           -             500
試劑三（μL）   1000       1000       1000           1000
室溫靜置2min 后，10000g 常溫離心5min，取上清測(cè)定400nm處的吸光值A(chǔ)。分別記為A測(cè)定管、A對(duì)照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

三、S-NAG 活力計(jì)算：
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol 對(duì)硝基ben酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-NAG活力（U/g 土樣）＝ΔA÷ (ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V 反總÷W÷T =1.44× ΔA÷ ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W。

T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；
V 反總：反應(yīng)體系總體積：6×10-4 L；
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，100μmol/L；
W：樣本質(zhì)量。

注意事項(xiàng)：
1、當(dāng)ΔA 大于1 時(shí)，建議將上清液稀釋后進(jìn)行測(cè)定；當(dāng)ΔA 小于0.02 時(shí)，建議延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。計(jì)算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)或注意反應(yīng)時(shí)間變化。