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| 產(chǎn)地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 貨號(hào) | R0050 |
| 用途 | 本核蛋白提取試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法 |
| 英文名稱(chēng) | Nuclear Protein Extraction Kit |
| 包裝規(guī)格 | 50T |
| 純度 | 50T% |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 1年 |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
| 別名 | 細(xì)胞核蛋白提取試劑盒 |
|---|---|
| 英文名稱(chēng) | Nuclear Protein Extraction Kit |
| 儲(chǔ)存條件 | 附件PMSF-20℃，其它試劑4℃。有效期1年 |
| 單位 | 瓶 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 本核蛋白提取試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個(gè)過(guò)程只需約60分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細(xì)胞中分離出來(lái)。得到的蛋白可以用于Western blot等實(shí)驗(yàn)。本試劑盒通過(guò)漿蛋白抽提試劑使細(xì)胞膨脹破裂，釋放出胞漿蛋白，再通過(guò)離心得到細(xì)胞核。然后通過(guò)核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。本試劑盒可以抽提50/100個(gè)樣品（每個(gè)樣品約2×106個(gè)Hela細(xì)胞或40mg組織）。
規(guī)格：50T/100T
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑盒組成 | 50T | 100T |
漿蛋白抽提試劑 | 25ml | 50ml |
核蛋白抽提試劑 | 5ml | 10ml |
PMSF（100mM） | 300μl | 1ml |
保存：核/漿蛋白抽提試劑4℃保存，PMSF于-20 ℃保存。
操作方法：
裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
一、對(duì)于體外培養(yǎng)細(xì)胞：
1．根據(jù)用量取適當(dāng)?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。PMSF需現(xiàn)用現(xiàn)加，若目標(biāo)蛋白含有豐富的半胱氨酸，可以在兩種蛋白抽提液中加入DTT至終濃度0.5mM。
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用PBS洗一遍，用細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞，或用EDTA消化后吹打下細(xì)胞（*不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清留下沉淀備用。
3．對(duì)于懸浮細(xì)胞：用PBS洗一遍，500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用。
4．每20μl細(xì)胞沉淀加入200μl漿蛋白抽提試劑（2×106個(gè)細(xì)胞沉淀的體積約20μl或40mg）。
5．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當(dāng)延長(zhǎng)），必須使細(xì)胞沉淀完全分散開(kāi)成單細(xì)胞懸液。細(xì)胞沉淀分散不完全會(huì)導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量降低。
6．冰浴10分鐘。
7．*轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒，4℃ 12000～16000g離心10分鐘。
8．上清即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白，立即吸取上清至預(yù)冷的樣品管中備用，進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western等實(shí)驗(yàn)，但蛋白濃度較低，可根據(jù)需要進(jìn)行相應(yīng)濃縮。
9．沉淀即為細(xì)胞核，要完全吸盡殘余的上清（避免細(xì)胞漿蛋白的污染），加入50-100μl核蛋白抽提試劑。
10．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當(dāng)延長(zhǎng)）至沉淀完全分散，冰浴10分鐘。
11．*轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒，4℃12000～16000g離心10分鐘。12．立即吸取上清至預(yù)冷的樣品管中，此即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白?？蛇M(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-70℃凍存。 對(duì)于組織樣品： 把組織稱(chēng)重后，盡可能切成非常細(xì)小的碎片，按每50mg組織加入200μl-500μl PBS，用勻漿器冰上勻漿制成細(xì)胞懸液，500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清，收集沉淀。加入200μl漿蛋白抽提試劑后接上述步驟5。
注意事項(xiàng)：
1．裂解得到的蛋白樣品，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用Bradford法測(cè)定蛋白濃度，可以選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白定量試劑盒(貨號(hào)PC0020)測(cè)定蛋白濃度。
2．對(duì)于組織樣品，本試劑盒適用于新鮮組織，對(duì)凍存組織抽提效果較差。
3．為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
參考文獻(xiàn)：
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《The protective role of Nrf2-Gadd45b against antimony-induced oxidative stress and apoptosis in HEK293 cells》 作者:XingkangJiang,ZeshengAn,ChaoLu,YueChen,EDu,ShiyongQi,KuoYang,ZhihongZhang,YongXu 期刊:Toxicology letters 影響因子:3.166 PMID:27208483
《Lactobacillus plantarum NA136 improves the non-alcoholic fatty liver disease by modulating the AMPK/Nrf2 pathway》 作者:Zijian Zhao，Chao Wang ，Li Zhang，Yujuan Zhao，Cuicui Duan，Xue Zhang，Lei Gao，Shengyu Li 期刊:Applied microbial and cell physiology 影響因子:3.67 PMID:31115630
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652
《l-Proline Alleviates Kidney Injury Caused by AFB1 and AFM1 through Regulating Excessive Apoptosis of Kidney Cells》 作者:Huiying Li , Songli Li, Huaigu Yang ,Yizhen Wang , Jiaqi Wang , and Nan Zheng 期刊:Toxins 影響因子:3.895 PMID:30995739
《β?elemene inhibits oxygen?induced retinal neovascularization via promoting miR?27a and reducing VEGF expression》 作者:Weilai Zhang, Lei Chen ,Jin Geng, Limin Liu, Li Xu 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:30664207
