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| 產(chǎn)地 | 中國 |
| 品牌 | solarbio |
| 貨號 | P9201 |
| 用途 | 細(xì)胞分離 |
| 英文名稱 | Neutrophil (mouse) Isolation Kit |
| 包裝規(guī)格 | 200ml/kit |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 6個(gè)月 |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
| 商品貨號： | 商品品牌： | 規(guī)格 | 基本售價(jià)： | 選擇規(guī)格 |
|---|---|---|---|---|
| P9201-200ml/KIT | Solarbio | 200ml/KIT | 800.00元 |
操作步驟：
1. 取新鮮抗凝全血，血液體積小于5mL時(shí)，在離心管中先加入4mL試劑A，后將2mL試劑C小心疊 加于試劑A之上，形成梯度界面（血液體積大于等于5mL，試劑A與試劑C比例2：1，試劑總量與稀 釋后的樣本量相等。但二者的總體積不能超過離心管的三分之 二，否則會影響分離效果），將血液平鋪到分離液液面上方， 注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液， 然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，? 形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時(shí)間較長，在離 心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象。）
2. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積 越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長，*的分離條件需摸 索，離心轉(zhuǎn)速*不超過1200g）。
3. 離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層，上層細(xì) 胞為單個(gè)核細(xì)胞層，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層，如圖所示（個(gè) 體差異或者是分離條件不同，粒細(xì)胞層可分離不明顯）。
4. 用吸管小心吸取試劑C與試劑A之間以及試劑A中的中性 粒細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌 細(xì)胞。250g，離心10min（如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞 裂解液）。
5. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心 10min。
6. 重復(fù)步驟5
7. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。
注意事項(xiàng)：
A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時(shí)間，請?jiān)跓o菌條件下啟封，避免 微生物污染。。
B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是 分離示意圖 血漿層 單個(gè)核細(xì)胞層 試劑 C 試劑 A 紅細(xì)胞層 中性粒細(xì)胞層
溫度較低的條件下離心，可能會導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。
C. 血液樣本*為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），為保持淋巴細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。
D. 血液樣本不需稀釋，直接進(jìn)行分離即可。
E. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集， 大大降低細(xì)胞得率及純度。
F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。
G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸 索*的分離條件。
H. 如果要進(jìn)一步對分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生 物污染。
I. 不同動物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提 供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。
參考文獻(xiàn)
1. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.
2. Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.
3. Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74.
4. Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.
5. Recalde HR. A simple method of obtaining monocytes in suspension. J Immunol Methods. 1984 Apr 13;69(1):71-7.
6. B?yumA,L?vhaugD,TreslandL.Separation of leucocytes: improved cell purity by fine adjustments of g radient medium density and osmolality. Scand J Immunol. 1991 Dec; 34(6):697-712.
7. Harris R, Ukaejiofo EO. Tissue typing using a routine one-step lymphocyte separation procedure. Br J Haematol. 1970 Feb; 18(2):229-35.
相關(guān)產(chǎn)品：
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